無菌性髄膜炎患者からのエンテロウイルスの検出―大分県

大分県において、2013年第４週～第32週までに採取された無菌性髄膜炎患者検体からのウイルス検出状況について報告する。

患者発生状況：患者定点からの報告は多くない。しかし、第24週（6/10～6/16）以降、検査定点より無菌性髄膜炎と診断されて当センターに搬入される検体が増加し、第31週（7/22～7/28）に入ってようやく減少してきた（図１）。

材料および方法：2013年１～８月に無菌性髄膜炎と診断され、当所に搬入された患者27名36検体（髄液23検体、咽頭ぬぐい液13検体）を検査材料とした。エンテロウイルスの遺伝子検査は、まず、スクリーニングとしてVP4/VP2領域を標的としたsemi-nested PCR法¹⁾を行った。エンテロウイルス陽性のものについては、VP1領域を標的としたnested PCR法²⁾およびダイレクトシークエンスで塩基配列を決定し、BLASTによる相同性検索で型別同定を行った。また、得られた塩基配列（355bp）を用いて近隣結合法による系統解析を行った。

ウイルス分離は、７細胞（HEp-2、RD-18S、Caco-2、MARC-145、Vero 9013、Vero E6、LLC-MK2）を使用し、１代を１週間として３代目まで継代および観察を行った。分離株は中和試験を行うとともに、VP1領域を標的としたnested PCR法を用いて同定した。

結果および考察：遺伝子検査を実施した36検体のうち、22検体からエンテロウイルスが検出された。型の内訳は、Echovirus30（Echo30）が13検体、Echovirus6（Echo6）が7検体、Coxsackievirus A9（CA9）が2検体であった。検出された患者の年齢分布をみると、５～９歳が最も多く17検体であった。エンテロウイルス以外ではCMVとHHV6が各１件ずつ検出された（表1）。

ウイルス分離については、Echo30が8株、Echo6が5株、ともにRD-18S およびCaco-2で分離できた。CA9はCaco-2で２株分離できた。

今回得られたEcho30およびEcho6と、これまで国内外で報告されている株の系統樹を作成したところ、今回分離されたEcho30株は、VP1部分配列においてBastianii（参照株）と約80％一致しているが、GenBankに登録されている2008～2010年国内分離株とは5％程度異なっていた(図２)。Echo6については2010～2012年に欧州で報告された株とほぼ同一クラスターを形成した（図３）。

Echo30については、無菌性髄膜炎の患者検体から最も多く検出されているが、咽頭炎や手足口病、ヘルパンギーナ、肺炎と診断された患者からも検出されている。またEcho6についても咽頭炎で検出されている。好発年齢が幼稚園や小学校に通う児童であることより、９月以降の動向に注意が必要と考える。

重症熱性血小板減少症候群（SFTS）ウイルスの国内分布調査結果（第一報）

マダニ媒介性の重症熱性血小板減少症候群（SFTS）は、2013年１月に国内の患者が初めて確認され、遺伝子検査（RT-PCR）法によるSFTSの診断検査体制が全国的に整備された。その結果、2013年春（マダニの活動開始期）以降、28名のSFTS患者が確定されている（８月26日時点）。遡り調査の結果も含めると、2005年から現在までに計39名の患者が九州・四国・中国・近畿地方の13県（兵庫、島根、岡山、広島、山口、徳島、愛媛、高知、佐賀、長崎、熊本、宮崎及び鹿児島県）から報告されており、同地域にはSFTSウイルス（SFTSV）が分布していることが明らかである（http://www.niid.go.jp/niid/ja/sfts/3143-sfts.html）。

本病の発生が先に報告された中国では、SFTSVの主な媒介マダニはフタトゲチマダニとされ、また、ヤギ、ヒツジ、ウシ、イヌ等の動物がSFTSVの抗体を高率に保有している（すなわち、SFTSV感染歴がある）ことが報告されている。SFTSが流行している地域では、マダニとマダニに吸血される動物との間でSFTSVが循環・保持される仕組みが成立している。ヒトはSFTSVを有するマダニに咬まれることでSFTSに感染する。（なお、動物は感染しても発症しない。また、これまでに動物の血液等を介してSFTSVに感染し、SFTSに罹患した患者の報告はない）。日本国内には、命名されているものだけで47種のマダニが生息するとされるが、SFTSVを媒介するマダニの種類やその生息地域、SFTSVの保有率、動物との相互関係等、実態は明らかでない。SFTSVの国内分布状況を把握し、そのライフサイクルを明らかにすることは、患者発生のリスクを評価し、効果的な感染予防対策を立てる上で非常に重要である。

ヒトの患者血清からSFTSV遺伝子を検出する方法については既に確立され、診断検査に用いられているが、本年5月から開始された厚生労働科学研究「SFTSの制圧に向けた総合的研究（研究代表者　倉田毅）」において、マダニからのSFTSV遺伝子検出法及び動物のSFTSV抗体測定法が開発された。これらの新たに開発された検査法により、既に患者が発生している地域を中心に、一部、発生のない地域も含めて、これまでに入手できたマダニや動物血清の検体を用いて予備的調査を実施したところ、以下のことが明らかになった。

１）マダニについて： 中国、四国、近畿及び中部地方（9自治体）内のいくつかの地点について調査したところ、採取されたマダニ11種のうち、複数のマダニ種（フタトゲチマダニ、ヒゲナガチマダニ、オオトゲチマダニ、キチマダニ及びタカサゴキララマダニ）から、SFTSV遺伝子が検出された。また、これらのSFTSV保有マダニは、既に患者が確認されている地域（島根、山口、徳島、高知、兵庫県）だけではなく、患者が報告されていない地域（近畿：和歌山県、中部：福井、山梨、静岡県）においても確認された。

２）動物のSFTSV抗体保有状況について： 保存血清等を用いて調査した結果、シカでは、検体が得られた地域（19自治体）のうち、九州（福岡、熊本、宮崎、鹿児島県）、四国（愛媛県）、中国（島根、広島、山口県）、近畿（和歌山県）及び中部（長野県）地方でSFTSV抗体陽性動物が確認されたが、その他の地域（北海道、岩手、栃木、千葉、静岡、兵庫、徳島、高知、大分県）では陽性のシカは見つからなかった。イノシシでは、検体が得られた地域（15自治体）のうち、九州（熊本、鹿児島県）、四国（徳島、香川、愛媛、高知県）及び中国（広島県）地方で抗体陽性動物が確認されたが、その抗体陽性率は、シカの抗体陽性率に比較して低かった。また、その他の地域（千葉、長野、静岡、三重、兵庫、島根、大分、宮崎県）では抗体保有イノシシは見つからなかった。さらに、猟犬では、検体が得られた地域（16自治体）のうち、九州（熊本、宮崎、鹿児島県）、四国（香川、高知県）地方以外に、患者が報告されていない地域（近畿：三重県、中部：富山、岐阜県）でも抗体保有動物が存在した。一方、患者発生のある広島及び長崎県やその他の地域（新潟、長野、静岡、愛知、滋賀、沖縄県）では陽性の猟犬はみつからなかった。

以上のように、新たに開発された検査方法（マダニからのSFTSV遺伝子検出法及び動物のSFTSV抗体測定法）を用いて調査したところ、SFTSV保有マダニやSFTSV抗体陽性動物が、これまでに患者発生の報告があった地域以外でも確認されたことから、今後、さらに調査を行う必要が認められた。

今回の調査は、過去に他の感染症の調査のために収集されたマダニや動物血清検体なども含め、限られた期間内に、限られた地点において採取された検体について実施されており、地域ごとの検体数にもばらつきがあるなど、全国や各地域の実態を網羅的に反映したものではなく、得られた結果は暫定的なものである。今後、研究班としては、各自治体や関係者の協力を得ながら、対象地域や検体採取地点、動物の種類・頭数を広げて調査を実施することにより、マダニと動物におけるSFTSVのライフサイクルや各地域内におけるSFTSV保有マダニの分布様式・密度など、より詳細な実態解明を行っていきたい。

なお、今回の調査にあたって御協力をいただいた、大日本猟友会ならびに関係者の皆様に深謝申し上げます。

麻疹風疹混合ワクチン（MRワクチン）接種後に風疹に罹患した成人男性の１例－川崎市

川崎市において、麻疹風疹混合ワクチン（ＭＲワクチン）の副反応と風疹の罹患との鑑別に苦慮し、PCR検査で風疹の自然感染と判明した症例を経験した。

症　例：39歳男性、川崎市における「風しんの流行に伴う緊急対策事業」の接種対象であったため、2013年６月に麻疹風疹混合ワクチン（MRワクチン）を接種した。接種時の体温は36.3℃で、過去１カ月以内に家族や友人に麻疹、風疹に罹患した者はいなかった。勤務先の会社には、約１カ月前および３週間前に中国に海外出張した職員がいたが発症はなく、他に風疹に罹患した職員もいなかった。本人の海外渡航歴はなかった。

MRワクチン接種12日後に顔面および頭部に散在性紅丘疹が出現し、接種14日後には全身に広がったが、発熱はなかった。同日、医療機関を受診した際には、全身性発疹、頚部リンパ節軽度腫脹、耳介前部リンパ節腫脹、眼球結膜充血、膝関節痛が認められた。体温は36.8℃であったが、発疹が全身におよんでおり、麻疹、風疹などのウイルス感染症に罹患したか、あるいはワクチンによる副反応であるかの判別が困難であったため、ウイルス診断目的で血液、咽頭ぬぐい液、尿を採取し、症状消失まで自宅療養となった。

川崎市健康安全研究所でのPCR検査およびDNAシークエンス解析で、採取したすべての検体から遺伝子型1E風疹ウイルスが検出された。ワクチン株である遺伝子型1a風疹ウイルスではなかったため、自然感染により風疹に罹患していたことが判明した。

考　察：わが国では2012年の夏以降風疹患者が急増している。川崎市においても、2008年以降の届出数は年間１～３件であったものの、2011年、2012年は11件、71件と増加し、2013年は診断週第27週までの集計で440件と著増している。市内での大きな流行に伴い、川崎市では2013年４月22日より「風しんの流行に伴う緊急対策事業」としてMRワクチン接種費用の一部助成を開始した¹⁾。今回の症例は、この事業を利用したMRワクチンの接種後２週間以内の発症例であったが、検出された遺伝子型よりワクチン接種による副反応ではないことが確定している。風疹の潜伏期間は２～３週間であるため、接種の２～９日前に流行株に曝露し感染したと考えられる。

風疹ウイルスの遺伝子型分類（genotyping）は、これまでに13の遺伝子型（1a、1B、1C、1D、1E、1F、1G、1h、1i、1j、2A、2B、2C）が報告されている^{2, 3)}。かつてわが国では、遺伝子型1a 、1D、1jウイルスが時代とともに変遷しながら流行してきたが⁴⁾、近年では世界的な流行が認められている2B型が主流であり、次いで1E型が多い⁵⁾。2B型ウイルスは中東、ヨーロッパ、中南米、アフリカ、南～東南～東アジアで報告されており、1E型ウイルスは、中東、ヨーロッパ、アフリカ、西太平洋地域で発生している。

川崎市内で流行している風疹ウイルスも、その遺伝子型は２B型が多く、過去に１E型が検出されたのは2011年と2012年に各１件ずつ、計２件のみであった。今回検出された1E型は、2012年に検出されたものと遺伝子配列が100%一致しており、2011年に検出された1E型とは配列が異なることが確認されている⁶⁾。本症例は、2013年には市内で検出されていない遺伝子型のウイルスに感染しているが、感染経路は特定できておらず、海外から輸入されたウイルスに偶然曝露したか、あるいは輸入されたウイルスが国内に定着し今回の感染に至ったかは不明である。いずれにしても、ワクチン接種後の発症であったため、ワクチンの副反応との鑑別は難しく、感染対策および疫学的な検討を行う上でもPCR法による病原体遺伝子の検索は非常に有用であった。

結　語：本症例は、MRワクチン接種後にもかかわらず、抗体獲得前に野生株ウイルスに感染した事例であった。風疹特異的IgM抗体の上昇のみではワクチンの副反応との鑑別が困難な場合もあり、症状の程度や発症時期を考慮して速やかに遺伝子検査を実施し、感染対策につなげる必要があると考える。