国立感染症研究所

愛知県で2013/14シーズンに初めて分離されたB型インフルエンザウイルス（Victoria系統）の性状

2013年10月15日に上気道炎、下気道炎、発疹より麻疹を疑われた６カ月児より採取された咽頭ぬぐい液検体から、B型インフルエンザウイルスが分離された。患者は10月５日に発熱、10月８日にベトナムより入国。当研究所による麻疹・風疹およびパルボウイルスB19遺伝子検査は陰性、咽頭ぬぐい液検体をMDCK細胞、HeLa細胞、RD-18S細胞およびVero細胞に接種したところ、MDCK細胞において接種後４日目に細胞変性効果が認められた。このウイルス培養上清液に対して0.5％ニワトリ赤血球を用いた赤血球凝集（HA）試験を行ったところ、HA価は128倍を示した。そこで、国立感染症研究所より配布されている2013/14シーズン用インフルエンザウイルス同定キットにて赤血球凝集抑制（HI）試験による型別同定を行った。その結果、分離株はB/Victoria系統の抗B/Brisbane/60/2008血清（ホモ価640）に対してHI価1,280を示し、抗A/California/7/2009血清（同1,280）、抗A/Texas/50/2012血清（同2,560）、B/Yamagata系統の抗B/Massachusetts/02/2012血清（同640）に対してはHI価＜10を示したため、B型インフルエンザウイルス（Victoria系統）と同定された。また、咽頭ぬぐい液検体より抽出したRNAにて実施したリアルタイムRT-PCR遺伝子検査においてもB型遺伝子を検出した。

HA、NA遺伝子解析
分離されたB/Aichi（愛知）/62/2013株はHA遺伝子（1,041塩基）系統樹解析により2011/12シーズンワクチン株（B/Brisbane/60/2008）と同じクレード1aに分類され、GISAID（The Global Initiative on Sharing All Influenza Data）に登録されている2013年６～９月の分離株（10月28日確認）と同じ分岐に属していた（図）。しかし、BLAST検索で100％の相同性を有する株は認められなかった。また、当研究所で2012/13シーズンの１～５月に分離された６株も同じ分岐に属していた（図）。NA遺伝子の系統樹解析ではB/Brisbane/60/2008株と比べて3アミノ酸（S295R、N340D、E358K）が異なる2011/12および2012/13シーズン分離株（当研究所）由来の分岐に属していた。また、既知のノイラミニダーゼ阻害剤に対する耐性変異は検出されなかった。

2013/14シーズンに入り、県内195定点医療機関からのインフルエンザ患者報告は、11月第１週現在10例前後(定点あたり0.05)である^1）。今回の事例は発熱から検体採取までに10日（入国後７日）を要し、発疹が認められた乳児症例であるため、B型インフルエンザ感染時期は国外輸入症例若しくは入国後の何れも可能性が考えられる。今シーズン国内でのB型インフルエンザウイルスの分離・検出状況は11月11日現在^2）Victoria系統4株、山形系統4株、系統不明１株である。和歌山県においては山形系統による集団発生が認められており^3）、今後どちらの系統が流行するのか発生動向に注意する必要がある。

和歌山市における風疹の流行状況（2013年第1週～第35週）について

はじめに： 2013年は全国的に風疹の流行がみられ、2013年８月現在で風疹患者の報告数が13,937件となっている¹⁾。和歌山市では、全国的な風疹患者の増加に伴い積極的に遺伝子検査を実施した。2013年第１週～第35週までに市内各地から検体が搬入され、医療機関30施設の患者から風疹ウイルスが検出されたことにより、和歌山市内の風疹の流行状況が詳細に把握できたので報告する。

検査方法：麻疹・風疹疑い患者26人、風疹疑い患者110人の計136人について、咽頭ぬぐい液134検体、血液43検体、尿２検体の合計179検体が搬入された。遺伝子検査は、風疹検出マニュアル第２版²⁾に準じて、NS領域のNested PCRを実施した。ウイルス分離は、遺伝子検査陽性患者の咽頭ぬぐい液または血液をVero E6細胞に接種し、35℃で1週間程度培養した。さらに、分離株を用いてE1領域のNested PCRを実施し、ダイレクトシークエンス法により739bpの塩基配列を決定し、NJ法により系統樹解析を行った。

検査結果：患者136人中83人から風疹ウイルスの遺伝子が検出された。検体別検出数は、咽頭ぬぐい液82検体、血液26検体であり、尿からは検出されなかった。また、咽頭ぬぐい液と血液の両方を採取した患者35人中31人から風疹ウイルス遺伝子が検出されたが、そのうち両検体から検出されたのは25人、咽頭ぬぐい液からのみ検出されたのは６人であった。尿を採取した患者２人は、同時に咽頭ぬぐい液も採取したが、両検体とも風疹ウイルス遺伝子は検出されなかった。ウイルス分離については、遺伝子検査陽性患者83人すべてから風疹ウイルスが分離された。風疹ウイルスの週別検出状況は、第８週、第11週、第12週、第15週に１人から検出され、第16週から増加し、第21週には17人とピークとなった。以降、ウイルスの検出数は減少し、第32週からは検出されなくなった（図１）。年齢別では、20～29歳までが28人と最も多く、次に30～39歳までが23人と多かった（図２）。男女別では、83人中57人（69％）が男性、26人（31％）が女性であり、男性からの検出数が女性の約２倍であった。分離株の系統樹解析の結果、分離株83株中80株が2B型、３株が1E型であった（図３）。

考　察： 2013年７月現在の全国の風疹ウイルス検出・分離状況³⁾は、2013年第１週から検出され始め、ピークは第21週で、その後は減少している。男女別と年齢別では、男性が女性より多く、男性では30～39歳、女性では20～29歳で最も多く検出されている。これら全国の流行分布と和歌山市の流行分布はほぼ一致していることが分かった。また、市内の30代と40代において、男性からの検出数が圧倒的に多いのは、同年代の女性と比較すると抗体保有率が低くなっている感染症流行予測調査（風疹HI抗体保有状況）⁴⁾のデータを反映していると考えられる。遺伝子検査では、咽頭ぬぐい液と血液の２検体を採取している遺伝子検査陽性患者31人中６人の血液から風疹ウイルス遺伝子が検出できず、検査材料としては、咽頭ぬぐい液の方が血液より有効であると思われた。系統樹解析の結果、市内流行の主流であった2B型は、80株中79株がRVs/Aichi.JPN/18.13/2と近縁の株で、もう１株はRVi/Chiba.JPN/48.12に近縁の株であり、２つのサブクラスターを形成した。第11週、第20週、第28週に散発的に発生した1E型3株は、RVs/Aichi.JPN/18.13/1と近縁の株であった。ワクチン接種歴がある５人から風疹ウイルスが検出されたが、これら５人の分離株の遺伝子型は2B型を示した。

おわりに：和歌山市内の第1週～第35週までの風疹の流行状況は、積極的な検査の実施と市内全域にわたる多くの医療機関から検体が搬入されたことにより詳細に把握することができた。

2004年と2012年の風疹患者の増加後、通常より多くの先天性風疹症候群（CRS）患者が確認されており、2013年８月現在では、既に2012年を上回るCRS患者数が報告されている⁵⁾。今回の流行では、特に20代と30代の世代に風疹患者が多いことから、CRS患者の増加が危惧されている。和歌山市においては、まだCRS患者の報告はないが、引き続き風疹検査を積極的に実施し、風疹患者およびCRS患者の発生状況について注視していきたい。